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甲基化检测(BSP)

甲基化检测(BSP)

简要描述:
甲基化检测(BSP):用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,则未发生甲基化的胞嘧啶被转化为niaomiding,而甲基化的胞嘧啶不变。随后设计BSP引物进行PCR,在扩增过程中niaomiding全部转化为胸腺嘧啶,然后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化称为BSP-直接测序方法。

更新时间:2024-09-26

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厂商性质:其他

甲基化检测(BSP)


甲基化检测(BSP)原理

BSP技术的核心在于利用亚硫酸氢盐处理基因组DNA。在这个过程中,所有未发生甲基化的胞嘧啶(C)会被转化为niaomiding(U),而甲基化的胞嘧啶则保持不变。随后,通过PCR扩增处理后的DNA片段,在扩增过程中,niaomiding(U)会转化为胸腺嘧啶(T)。最后,对PCR产物进行测序,通过比对测序结果中的胞嘧啶(C)和胸腺嘧啶(T)的比例,可以判断原始DNA中CpG位点的甲基化状态。

BSP技术步骤

  1. ?DNA提取与纯化?:首先,从待测样本中提取基因组DNA,并进行纯化以去除杂质。

  2. ?亚硫酸氢盐处理?:将纯化后的DNA用亚硫酸氢盐进行处理,使未甲基化的胞嘧啶转化为niaomiding。

  3. ?PCR扩增?:设计特异性引物,对处理后的DNA进行PCR扩增,扩增过程中niaomiding转化为胸腺嘧啶。

  4. ?克隆与测序?:将PCR产物克隆至载体中,挑取多个阳性克隆进行测序。测序结果将反映CpG位点的甲基化状态。

  5. ?数据分析?:将测序结果与原始DNA序列进行比对,统计甲基化位点及数量,分析甲基化程度。

BSP技术特点

  1. ?高灵敏度?:BSP技术能够检测单个CpG位点的甲基化状态,具有jigao的灵敏度。

  2. ?单碱基分辨率?:该技术能够实现单碱基水平的甲基化检测,提供详细的甲基化图谱。

  3. ?定量分析能力?:通过统计测序结果中的C/T比例,可以计算出精确的甲基化程度百分比。

  4. ?实验步骤复杂?:然而,BSP技术的实验步骤相对较多,且成本较高,需要一定的实验技能和经验。


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